Para el estudio de la variabilidad genética de la raza se obtuvieron muestras sanguíneas de 16 animales (14 hembras y 2 machos), y se procedió a la extracción del ADN según protocolo estándar con mezcla fenol-cloroformo (Ausubel et al., 1987). Los 15 marcadores de ADN de tipo microsatélite utilizados fueron: CSSM66, ETH10, ETH152, ETH225, ETH3, HEL1, HEL5, HEL9, ILST5 INRA23, INRA35 INRA37, INRA5, INRA63 y TGLA44, todos ellos marcados fluorescentemente. Los productos amplificados de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) fueron analizados mediante electroforesis capilar, con un secuenciador de ADN Applied Biosystems 3100 (ABI 3100), e interpretados posteriormente mediante el software de análisis GENESCAN, utilizando para ello un marcador estándar de tamaños con fluorescencia TAMRA 350.

El análisis genético-estadístico se realizó a partir de las frecuencias alélicas aportadas por los marcadores. Se calcularon los estadísticos de variabilidad genética, heterocigosidad esperada (He) y observada (Ho) y se realizó el test de equilibrio de Hardy-Weinberg usando el método de la Cadena de Markov mediante el programa GENEPOP (Raymond and Rousset, 1995). Así mismo, se calculó el índice de contenido polimórfico (PIC) y la probabilidad de exclusión de cada uno de los marcadores y su combinada (PE). La estructura genético-poblacional se analizó mediante los F-estadísticos, implementados en el programa FSTAT (Goudet, 2000). Para el estudio de las relaciones genéticas entre las razas y la posterior construcción del dendrograma se utilizó la distancia DA de Nei (Nei et al., 1983) y el algoritmo NJ (neighbourn-joining method) (Saitou and Nei, 1987), usando para ello el programa DISPAN (Ota, 1993). Como referencia y entronque para el diseño de las relaciones filogenéticas de la raza Pallaresa, se utilizó la información de las frecuencias génicas de otras razas españolas (Avileña, Bruna dels Pirineus, Mallorquina, Morucha, Pirenaica y Retinta) procedentes de los trabajos realizados por Cañón et al. (2001) y Aranguren-Méndez et al. (2002).

Todos los marcadores amplificaron correctamente y fueron polimórficos en la raza Pallaresa. El promedio de diversidad genética poblacional (He), sobre todos los loci, fue de 0,663±0,043, valor de variabilidad genética comparable al obtenido en otras razas bovinas europeas (Kantanen et al., 2000; Cañón et al., 2001). El índice de contenido polimórfico (PIC) y la probabilidad de exclusión de cada uno de los marcadores y su combinada (PE) también fueron comparables a otras poblaciones, siendo el valor de PE combinada del 99,9%, confirmando los marcadores genéticos utilizados, su utilidad, tanto para la identificación individual como para la verificación de paternidades.

El déficit global de heterocigotos fue del 13,6% (P<0,001), aunque únicamente 4 loci (HEL1, INRA5, INRA35 e INRA37) contribuyeron al mismo, por lo que no podemos atribuir a la consanguinidad ser la causa principal que haya ocasionado dicho déficit. La presencia de alelos nulos no detectables podría explicar parte del importante déficit de heterocigotos observado en estos marcadores, tal como ha sido reportado previamente en otros trabajos (Høj Petersen and Bendixen, 2000; Kantanen et al., 2000).

Actualmente todos los representantes de la raza bovina Pallaresa están ubicados en un único rebaño. Lógicamente, hubiéramos esperado que el déficit de heterocigotos observado y causado por la consanguinidad (debido a un mayor grado de apareamiento entre individuos emparentados) fuera realmente importante. Sin embargo, y tal como podemos ver por los resultados obtenidos esto no ha sido así. Una posible explicación a que esta población de reducido tamaño censal se halle mayoritariamente en equilibrio genético de Hardy-Weinberg, podría deberse al hecho de que dicho rebaño se ha ido constituyendo, en las últimas décadas, a partir de la reagrupación de individuos, coincidentes con el prototipo racial (principalmente el color blanco uniforme de su capa), de diferentes lugares y propietarios de estos valles pirenaicos (comunicación oral). La diferente procedencia de algunos de los individuos (generalmente los más viejos), y la más que probable aportación genética, en algún determinado momento, por parte de individuos de la raza Bruna dels Pirineus (comparten rebaño y pastos de puerto), habrían ayudado a mantener los niveles de heterocigosidad y variabilidad genética en esta reducida y localizada población.

Y ya por último, el dendrograma nos muestra, de forma gráfica, la estrecha relación existente entre la vaca Pallaresa y la Bruna dels Pirineus, así como la relación con otras razas peninsulares y la insular Mallorquina. Los valores en los puntos de bifurcación del árbol representan los porcentajes de replicaciones bootstrap después de 1.000 permutaciones.